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本文主要介绍4种Transwell实验的实验步骤，具体包括：Transwell肿瘤细胞迁移实验、Transwell上皮细胞培养实验、TranswellB16细胞的体外迁移实验、Transwell内皮细胞HMEC-1迁移实验。一、Transwell肿瘤细胞迁移实验过程与Transwell侵袭实验基本一致，不同的只是不需要铺Matrigel。由于没有基质胶的阻挡，细胞穿过膜的速度较侵袭实验明显加快，所以细胞量要更大。我做侵袭实验的细胞密度是1×10°，而迁移实验的密度是1×10°...

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重组蛋白表达技术要点

大肠杆菌（E.coli）表达重组蛋白的技术经过多年的发展，已经成为一个非常成熟表达系统。为了在大肠杆菌表达体系中获得可溶以高表达产量的蛋白，一个优秀的表达策略是重要的。为了高效表达有活性蛋白，一般需考虑以下几个因素：1.宿主体系的选择细菌、酵母、哺乳动物细胞、丝状真菌和单细胞藻类均可以作为表达宿主，每一种表达宿主都有各自的优缺点。如果需要表达的蛋白具有真核的翻译后修饰（糖基化修饰），那么可以选择酵母、哺乳动物细胞等，而大肠杆菌等原核表达体系则不适用。大肠杆菌作为表达外源蛋白广...

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凝胶电泳的染色方法

凝胶电泳是研究蛋白质性质的一种相对简单、快速和高灵敏度的工具。它是分析化学、生物化学和分子生物学的主要工具。通过电泳分离蛋白质是基于这样一个事实，即带电分子将在施加电场时通过基质迁移。蛋白质电泳分离的基质是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化学试剂是单体丙烯酰胺和N，N'-双丙烯酰胺（双-丙烯酰胺）。聚合丙烯酰胺和双丙烯酰的方法是使用TEMED（四*基乙二胺）和过硫酸铵。聚丙烯酰胺凝胶内部的聚合形成了一个交联的微孔网络。这种孔隙网络允许小蛋白质分子快速通过，同时减缓较大蛋白质的...

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Vero细胞无血清悬浮培养技术验证

大多数用于抗体生产的细胞主要基于动物细胞上的开发，如MRC-5人二倍体细胞、Vero猿猴肾上皮细胞、Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞和鸡胚成纤维细胞。尤其是来自非洲绿猴肾脏的Vero细胞已被广泛用于vaccine生产，因为它们被WHO机构证明没有致癌潜力。许多vaccine，例如针对基孔肯雅热、登革热、日本脑炎、病毒性胃肠炎、脊髓灰质炎、狂犬病、罗斯河热、严重急性呼吸系统综合症、天花、西尼罗河脑炎和流感的vaccine都是使用Vero细胞培养系统开发的。用于viru...

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一文了解细菌内毒素

内毒素(Endotoxin)是一种脂多糖(LPS)，来源于革兰氏阴性细菌外膜，其细胞壁外膜的外部脂质成分由内毒素分子组成，细胞死亡或分解后被释放出来。LPS具有三个结构，由菌体特异性多糖、非特异性核心多糖和脂质A三部分构成。内毒素单体分子量为10kDa左右，在不同成分水溶液中，可形成大分子聚集体，大的可超过1000kDa。类脂A是内毒素多种生物活性或毒性反应的主要基团。该基团没有种属特异性,所以各属细菌的类脂A结构相似,其毒性反应相似，如发热、血液流动力学改变、弥漫性血管内凝...

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