细胞培养前的灭菌处理技术

无论从事何种细胞培养，无菌技术都是绝对最重要的部分。细胞培养前的无菌处理技术分为三部分即：①工作环境及表面的处理；②细胞培养所用玻璃及塑料制品的处理；③实验者的操作技术；还有哺乳动物细胞的处理及维持细胞生长所需要的培养液的无菌处理。1.工作环境的无菌处理在细胞培养早期，研究者可以依靠操作技术和尽可能地靠近火焰以达到细胞的无菌化，随着工作环境的机械学发展，其无菌化程度已得到大大提高，免去了实验者手指被烧灼的痛苦。层流超净台是使工作台无菌化有效的手段，组织培养可在相对密闭而几乎无...

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悬浮细胞的电融合转染技术简介

悬浮细胞的电融合转染技术融合悬浮细胞的步骤与电穿孔的很类似，只是在进行高强度的电场脉冲前后，必须用低幅、高频电场使细胞排成一条链。1用融合介质（FM）洗悬浮细胞两次，然后悬于FM中。洗涤细胞时，在台式离心机上1000rpm下离心3分钟，得到细胞沉淀，弃去上清液将细胞悬于新鲜FM介质中。2将悬浮细胞转移到相应的融合室内。假如要使两种不同的细胞彼此融合，转移前要充分混合。3启动介电电泳场，其振幅通常小于200V/cm，频率在2MHz以内，用显微镜检测细胞是否排成一条链，调节振幅和...

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发酵罐中微生物生长特性及其在发酵工业中的应用

微生物是发酵工业的灵魂，对微生物控制的发酵过程进行优化，我们要了解发酵罐中微生物的生长反应特性。微生物细胞生长是细胞个体内许多化学反应的综合结果。这些反应包括合成提供其它反应需要的吉布斯自由能；利用底物合成结构单元，再聚合成大分子物质，供合成细胞所需等。正常情况下，微生物细胞为了确保有序和高效生长，必须将这些反应有机地结合在一起，经济地分配胞内各代谢途径的通量。大肠杆菌是发酵研究中用得最多的微生物。在大肠杆菌生长过程中前人已观察到下列现象∶(1)在大肠杆菌快速生长期间，生物合...

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悬浮细胞电穿孔转染法的实验流程详解

[实验原理]当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法，电穿孔已被广泛用于各种细胞类型，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，它还能作为注射方法（称为电注射），把各种外源物质引入活细胞。与其他常用的导入外源物质的方法相比，电穿孔具有很多优点。一.不必象显微镜那样使用玻璃针，不需要技术培训和昂贵的设备，可以一次对成百万...

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内毒素去除方法有哪些

内毒素去除方法概述内毒素是存在于革兰氏阴性细菌外膜中的致病因子，具有较好的耐热性和稳定性，对人体健康有着不可忽视的危害。本文将概述内毒素的成分和特性，并讨论了目前常见的内毒素去除方法包括超滤去除法、活性炭法、表面活性剂萃取、强酸强碱、层析法等。同时还分析了各种方法的优缺点以及在工业生产中的应用前景。一、超滤去除法和活性炭法内毒素由多糖O抗原、核心多糖和类脂A等组成，作为细菌外膜的主要结构成分，不易被化学药品破坏。为了有效去除内毒素，可以采用多种方法。超滤去除法通过使用孔径适当...

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