使用生物反应器研究乳腺癌亚型细胞外囊泡产生技术

使用生物反应器研究乳腺癌亚型细胞外囊泡产生技术使用传统体外方法生产的EV的深入表征和验证由于需要大面积的细胞单层和大量的培养基，培养可能具有挑战性。该实验方法使用贴壁细胞生物反应器系统以节省空间、资源和时间的方式同时培养多种不同亚型的乳腺癌细胞系，从而能够持续生产大量用于下游实验的EV。一、生物反应器接种、适应和维护培养基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/链霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培养基B：AdvancedDMEM/F-12(...

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细胞培养常见问题汇总

细胞培养常见问题汇总1冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。2细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后...

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层析工艺放大需要遵循的原则

层析工艺放大原则包括线性放大原则和固定保留时间原则。线性放大原则线性放大原则是工艺放大过程中常用的原则，其核心思路是保持层析柱柱高和线性流速不变，只放大层析柱直径和体积流速。固定的柱高和线性流速理论上可以保证相同的保留时间、层析中溶液用到的CV数和洗脱样品CV数，较大程度保证相同的纯化效果。线性放大原则的具体操作方法可参见下表：层析工艺在实际的应用过程中，线性放大可能会遇到几个问题，一是层析设备供应商提供的层析柱都是几个固定规格，可能无法适配具体某项的工艺需求；二是当层析柱直...

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荧光定量PCR实验中PCR仪器选购技巧

聚合酶链反应(PCR)技术是无数研究和测试实验室的主要技术，涉及的领域包括生物医学、基因编辑、食品微生物学测试等。荧光定量PCR技术使用热循环来促进一系列反应，在这些反应中，DNA样本会快速、呈指数地复制，从而产生数百万或数十亿个序列拷贝。购买PCR仪器时，重要的是要考虑您的应用的最终目标、热循环设备的准确性和效率以及仪器的容量和灵活性。本文概述了PCR仪器可用的不同选项和功能，以帮助您选购合适的PCR仪。1.PCR与qPCR与dPCR虽然所有PCR系统都使用聚合酶链式反应复...

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应用差速离心法分离外泌体的原理

外泌体是一种小的(40-100nm)细胞外膜囊泡，目前进行外泌体分离的普遍方法是差速离心法。应用差速离心法和粒径分析等是细胞外囊泡(EV)研究的重要步骤。已知细胞会分泌许多膜囊泡，这些囊泡的大小、分子含量及其形成机制各不相同具体取决于细胞的类型和当前状态。通常可以辨别出三个主要的EV群体：凋亡小体、脱落的囊泡和外泌体.凋亡小体是已知较大的囊泡，直径为800-5000nm，由凋亡后细胞的细胞质和质膜成分组成。脱落的囊泡和外泌体由非凋亡细胞释放。脱落的囊泡，也称为“胞外体”或有时...

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