使用微载体生物反应器规模化扩增 Vero 细胞的方法

绝大多数贴壁Vero细胞扩增培养都是使用微载体技术在搅拌式细胞生物反应器中进行的。在这里，细胞附着在微载体上，微载体被设计成在搅拌培养中保持悬浮。微载体的种类很多，主要分为固体和大孔两种，表面性质不同。几项研究比较了不同类型的微载体用于Vero细胞的繁殖.目前多数使用Cytodex1微载体.Cytodex1微载体是基于葡聚糖的固体微载体，显示带电表面，平均直径为180μm左右。近年来，国内生产的DISKS片状载体孔径只有15μm，单层厚度约0.44mm,可以维持较好的营养物质...

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克隆抗体的特点和应用

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上，创建立杂交瘤技术，他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠B细胞融合，成为杂交细胞系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具...

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多克隆抗体及抗体制备流程

抗体，又名免疫球蛋白(Ig)，是一种由B细胞产生的大型Y形糖蛋白，可在免疫防御中起主要作用。抗体与病原体的特定分子（即抗原）发生特异性结合。抗体以一个或者多个Y形单体存在，每个Y形单体由4条多肽链组成。每个Y形单体包含两条相同的重链（H）和两条相同的轻链（L），重链和轻链的序列和长度不同。Y形单体的顶部包含可变区（V），也称抗原结合片段（F(ab)）区。该区可与给定抗原上的表位特异性紧密结合。抗体的基本结构包含恒定区（C）和可结晶片段（Fc）区。这一区域对抗体的免疫应答功能非...

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蛋白酶K的应用

近年来，随着对蛋白酶K研究的深入，该酶的应用范围不仅在医疗诊断及科研领域得到了十分广泛的应用，该酶还作为替代其它作用范围较窄的蛋白酶，主要应用于造纸、工业制革、饲料生产、食品加工等行业中。此外，该酶还可以替代传统的通过化学方法处理原材料的方法，减少污染。在各行各业中，蛋白酶K的主要用途有：①在分离DNA和RNA的过程中，用于核酸酶的蛋白水解失活。蛋白酶K能降解与核酸结合的蛋白质，促进蛋白与核酸的分离，因此该酶在提取高分子量的核酸时具有很大的优势。蛋白酶K还常被用于RNA提取过...

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什么是蛋白酶K，蛋白酶K的生产有哪些挑战？

蛋白酶K(ProteinaseK)是一种广谱丝氨酸蛋白酶,蛋白酶K于1974年在fungusEngyodontiumalbum的提取物中发现。能合成该种蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Keratin)作为碳源和氮源的环境中生长，说明该酶可以消化角蛋白，因此被称为“蛋白酶K”。蛋白酶K由一条肽链组成，含有277个氨基酸，该蛋白的相对分子量~28.9kDa，蛋白酶K是一种稳定且具有高活性的丝氨酸蛋白酶。晶体和分子结构研究证据表明该酶属于枯草素家族，具有活性位点催化三联体(Asp39-...

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