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2023-43
据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识,只因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……,这将浪费大量时间、精力和金钱。世人皆知,细胞身娇体贵难养活,养好细胞实属不易。而这其中烦的是污染、怕的是掉包。因为尽管研究僧们有方法把一切污染的源头扼杀在摇篮之内,却没有火眼金睛辨别已经换了马甲的错误细胞。因而细胞一旦被李代桃僵,再资深的科研者都会阴沟里翻船,所以细胞鉴定显得尤为重要。为什么要进行细胞系鉴定?进行细胞系STR鉴定是很重要的。...
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2023-331
类器官是复杂的3-D器官样微组织,由多种分化的细胞类型组成,其结构组织类似于体内发现的细胞,具有中央腔和其他类似体内的结构特征。从ipsc诱导多能干细胞产生的类器官已被描述用于胃、肠、肺、大脑、肾、肝脏等各种组织,这些类器官是其他体外模型的有吸引力的替代品;这些微组织比2-D细胞培养或简单的3-D球体聚集体更好地概括了体内组织表型,但没有与器官外植体或组织切片相关的挑战,例如培养寿命有限。事实上,类器官保留了许多细胞培养的典型有利特征,例如维持稳定培养数月的能力,以及冷冻保存...
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2023-331
大多数细胞系和原代细胞培养物生长为单一厚度的细胞层(单层)或附着在玻璃或经过特殊处理的塑料基质上的薄片。为了保持培养物的健康和积极生长,通常需要定期对它们进行传代培养。常见的传代培养方法涉及通过使用蛋白水解酶(如胰蛋白酶或胶原酶)破坏细胞间和细胞与基质的连接。在细胞解离成主要由单细胞组成的悬浮液后,将它们稀释并转移到新的培养容器中。在那里它们可以重新附着并开始生长和分裂,经过一段时间的孵化后再次接近汇合。此时,它们可以再次进行传代培养或用于实验。以下指南描述了典型单层细胞培养...
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2023-329
hTERT成纤维细胞为永生化子宫内膜成纤维细胞(THESC)具有延长的寿命,并且在核型、形态和表型方面与原代亲代细胞相似。在功能上,THESCs显示激素治疗后蜕膜化的生化终点。THESCs来源于从患有肌瘤的成年女性身上获得的基质细胞。原代基质子宫内膜细胞通过用来自包装细胞系pA317-hTERT的上清液感染而永生化,该细胞系表达hTERT和嘌呤霉素抗性基因。hTERT成纤维细胞培养方案如下:一、所需材料Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)/F12(Sigma,D2...
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2023-329
在细胞上做基因研究的一般的过程就是:利用CRISPR-Cas9先做基因除(GeneKnockout),获得基因敲除细胞系纯合细胞:然后分析相关的生物学表型;最后做为对照还需要将原敲除的基因回补会到原细胞系中,做为对照细胞进行实验对比。而利用Cas9进行细胞敲除之后,细胞回补实验室要注意哪些问题?特别需要考虑的技术原理是那些?如何规划好实验流程,下面我们就一步步的进一下细胞其因敲除和回补实验的效率/价格/周期等。一、敲除细胞的方式一般都是纯合基因敲除细胞,当然也可以选择MixC...
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