研究生实验-大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化

大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化一、实验目的通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术。获得感受态细胞；制备含有目的片段的阳性克隆。二、实验原理转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(Rˉ，Mˉ)，它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。...

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分子生物学实验-DNA重组技术

DNA重组技术（连接）一、实验目的体外连接获得重组分子，用于转化受体细胞。二、实验原理DNA重组技术是用内切酶分别将载体和外源DNA切开，经分离纯化后，用连接酶将其连接，构成新的DNA分子。外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略有以下几种：1、带有非互补突出端的片段用两种不同的限制性内切酶进行消化可以产生带有非互补的粘性末端，这也是最容易克隆的DNA片段，一般情况下，常用质粒载体均带有多个不同限制酶的识别序列组成的多克隆位点，因而几乎总能找到与外源DNA片段末端匹配的限制酶切...

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分子生物学实验-载体和目的片段的酶切

实验三、载体和目的片段的酶切A载体和外源DNA的酶切一、实验目的学习和掌握核酸的酶切操作原理；通过酶切获得可进行体外重组的载体和外源DNA。二、实验原理限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。绝大多数限制酶识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列(如EcoRⅠ识别六个核苷酸序列：5'-G↓AATTC-3')，有少数酶识别更长的序列或简并序列。Ⅱ类酶切割位点在识别序列中，有的在对称轴处切割，产生平末端的...

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RAW264.7细胞系在破骨细胞培养中的应用

破骨细胞是骨吸收的主要功能细胞，在骨发育、生长、修复、重建中起着重要的作用。由于破骨细胞在体内数量较少且分离困难，目前常用的诱导法之一是利用RAW264.7细胞系进行破骨细胞培养。本文重点介绍了RAW264.7细胞系诱导法，以及调节信号通路中起关键作用的细胞因子。破骨细胞是调节骨组织代谢的重要细胞类型，在骨发育、生长、修复和重建中起着至关重要的作用。然而，由于破骨细胞在体内数量少且分离困难，研究者需要寻找合适的方法来进行破骨细胞的培养。近年来，利用RAW264.7细胞系进行破...

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质粒基因组提取实验步骤

DNA提取是生物学实验中常见的实验步骤，用于分离和纯化DNA以进行后续实验分析。本文将介绍使用天根质粒DNA提取试剂盒进行质粒基因提取的实验步骤。该试剂盒使用碱裂解法提取质粒DNA，具有简便快速、高效纯化的特点。实验步骤如下：一、培养细菌并制备含有质粒的细胞悬液：1.从平板上挑取单克隆细菌，转入含有3mLLB+Amp100培养基的试管中。使用含有抗生素氨苄青霉素的LB培养基可以选择性地培养含有质粒的细菌群体。2.在37℃的恒温摇床上振荡培养过夜，以促进细菌生长并扩增质粒。二、...

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